Equipos reversos rápidos y altamente sensibles RT II FÁCIL de la transcripción el reactivo de laboratorio para generar el cDNA del primero-filamento
Uso del equipo
Utilizado directamente para el análisis cuantitativo en tiempo real de la polimerización en cadena de la expresión génica.
Puede analizar rápidamente y exactamente cantidades de rastro de ARN tales como virus del ARN.
Transcripción reversa de las plantillas del ARN con la alta estructura secundaria contenta o compleja de la CROMATOGRAFÍA GASEOSA.
Kit Component Information
2×RT o-EasyTM mezcla: Revés Transcriptase de Foregene, inhibidor de la ARNasa, dNTPs, estabilizador, reforzador, optimizador y cartilla reversa de la transcripción (cartilla al azar, (despegue) cartilla oliga 18) con el ratio optimizado.
Tolerancia de la mezcla del RT
El 2×RT o-EasyTM la mezcla mostró una tolerancia muy alta a las sales del alcohol y de la guanidina después de probar análisis. El ARN purificado en el laboratorio tiene a menudo residuos de sales del alcohol y de la guanidina, que tienen un efecto inhibitorio fuerte sobre la transcripción reversa, dando por resultado efecto reverso insatisfactorio de la transcripción o eficacia reversa baja de la transcripción. La tolerancia de los productos fáciles de la serie de Foregene RT a las sales del alcohol y de la guanidina hace la transcripción reversa más fácil y más eficiente.
Análisis de la tolerancia del alcohol
Análisis de la tolerancia de la sal de la guanidina
Preparación antes de la operación
Se recomienda fuertemente que los usuarios leen las instrucciones cuidadosamente antes de usar este equipo. Los equipos fáciles de la serie del RT son fáciles de actuar, conveniente y rápido, y las instrucciones proporcionan el uso correcto del equipo entero. Prepare por favor los materiales y el equipo experimentales necesarios antes de usar.
Cantidad del ARN de la plantilla
El ARN de la plantilla se debe extraer preferiblemente de muestras frescas o almacenar en -80°C (repitió la congelación y el deshielo del ARN se debe evitar).
RT EasyTM II: (ARN del total 0.1pg-0.5μg o sistema)/10μl de 0.01pg-0.05μg mRNA.
Amplificación no específica
1. Diseño irrazonable de la cartilla.
Recomendación: Cartillas del diseño según principios de diseño de la cartilla.
2. Residuos Genomic.
Recomendaciones: Utilice un equipo reverso de la transcripción por ejemplo (gato. No. RH-01031) que contiene las cartillas del transporte-intrón de la ablación o del diseño del genoma.
RT-QPCR ninguna señal de la amplificación
1. Se degrada el ARN.
Recomendación: El material para la extracción del ARN debe estar tan fresco como sea posible, y el ARN de alta calidad y de gran pureza debe ser utilizado.
2. El ARN contiene los inhibidores.
Recomendación: Los inhibidores reversos de la transcripción incluyen generalmente el SDS, las sales de la guanidina, el EDTA, el etc. Se recomienda para lavar el precipitado del ARN con etanol del 70% para quitar los inhibidores.
3. Problemas de diseño de la cartilla.
Recomendación: Según el principio de diseño de la cartilla, reajuste las cartillas para la inspección.
La banda de la blanco aparece en el control en blanco
1. Contaminación de herramientas o de reactivo de funcionamiento.
Recomendación: Todos los reactivo o equipo para el experimento deben ser esterilizados. Sea cuidadoso y apacible evitar que las muestras de la DNA sean dibujadas dentro de la pipeta o se derramó fuera del tubo de centrífuga.
2. La contaminación ocurrió durante la preparación del sistema de reacción de la polimerización en cadena.
Recomendación: Tome las precauciones necesarias al dirigir, eg.: Guantes del látex del desgaste, extremidades de filtro del uso. Utilice la mezcla en tiempo real de la polimerización en cadena en un sistema de la contaminación-prueba.
3. Se degradan las cartillas.
Recomendación: Utilice la electroforesis de SDS-PAGE para detectar si las cartillas están degradadas, y substitúyala por las nuevas cartillas para los experimentos de la detección de la fluorescencia.
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