Mezcla preparada de antemano estupenda del Lnc-RT HeroTM I (con gDNase) para la síntesis del cDNA del primero-filamento del lncRNA Cat.No.RTL-09098/09099

Lnc-RT HeroTM I (con gDNase)

Mezcla preparada de antemano estupenda para la síntesis del cDNA del primero-filamento del lncRNA

Cat.No.RTL-09098/09099

Descripción:

El Lnc-RT HeroTM I (con gDNase) es un sistema reverso de la transcripción desarrollado especialmente para que el lncRNA quite rápidamente la contaminación genomic de la DNA. la mezcla 5×gDNase puede quitar rápidamente el genoma restante en ARN en 42°C por 2 minutos, evitando con eficacia la interferencia del genoma en resultados del qPCR.

La mezcla de 5×L-RT HeroTM contiene el revés Transcriptase de Foregene LncRNA desarrollado especialmente por Foregene, que es un nuevo tipo de transcriptase reverso específicamente para el lncRNA y otras plantillas complejas del ARN largo, con una afinidad más fuerte del ARN y una eficacia más alta de la grabación de la revocación. El sistema optimizado hace la tarifa reversa de la transcripción más rápidamente y puede transcribir fácilmente plantillas del ARN con el alto contenido de la CROMATOGRAFÍA GASEOSA y la estructura secundaria compleja. La primera síntesis del cDNA del filamento se puede terminar en 42°C en 15 minutos.

Especificaciones:

25×20μl Rxns, 50×20μl Rxns

Componentes del equipo

Información componente de los equipos

Mezcla de -5×gDNase: gDNA que quita el agente, es necesario utilizar el reactivo de acuerdo con las instrucciones de funcionamiento antes de la reacción del RT se realiza (el contenido interno del glicerol no puede ser congelado, y no puede ser congelado, que pertenece a los fenómenos normales).

- MEZCLA DE 5×L-RT HEROTM: Contiene el revés Transcriptase de Foregene Lncrna, el inhibidor de la ARNasa, DNTPS, Stabilifer, reforzador, optimizador, (despegue) cartilla oliga 18).

Features&advantages:

- Capacidad eficiente de quitar el gDNA, que puede quitar el gDNA en la plantilla en el plazo de 2 minutos.

- Puede invertir eficientemente la transcripción del lncRNA. Cuando el producto reverso de la transcripción se sujeta al qPCR, el valor del Ct es más bajo que el del sistema reverso convencional de la transcripción.

- Sistema reverso eficiente de la transcripción, tarda solamente 15 minutos para terminar la síntesis del primer cDNA del filamento.

- Plantillas complejas: las plantillas con el alto contenido de la CROMATOGRAFÍA GASEOSA y la estructura secundaria compleja se pueden también invertir con eficacia alta.

- el sistema reverso de la transcripción de la Alto-sensibilidad, plantillas del página-nivel puede también conseguir el cDNA de alta calidad.

- El sistema reverso de la transcripción tiene alta estabilidad termal, la temperatura óptima de la reacción es 42℃, y todavía tiene buen funcionamiento reverso de la transcripción en 50℃.

Requisitos del ARN de la plantilla

Es el mejor utilizar el ARN extrajo de muestras frescas o preservado en -80 °C.

- Integridad de la plantilla: buena integridad, ninguna degradación.

- Pureza de la plantilla: Los IONES, las proteínas, el EDTA, el etanol, los fenoles y otros diarios contenidos en ARN afectarán para invertir actividad del transcriptase y para afectar en última instancia a efectos reversos de la transcripción.

Dosificación del ARN de la plantilla

- Para el lncRNA: sistema total del μl RNA/20 del μg 10ng-1.

- Para el ARN general: ARN del μg 0.1pg-1 o 0.01pg-0.1 sistema total del μl del μg mRNA/20.

Información componente de los equipos

- mezcla 5×gDNase: gDNA que quita el agente, es necesario utilizar el reactivo de acuerdo con las instrucciones de funcionamiento antes de la reacción del RT se realiza (el contenido interno del glicerol no puede ser congelado, y no puede ser congelado, que pertenece a los fenómenos normales).

- MEZCLA DE 5×L-RT HEROTM: Contiene el revés Transcriptase de Foregene Lncrna, el inhibidor de la ARNasa, DNTPS, Stabilifer, reforzador, optimizador, (despegue₎ cartilla oliga ₁₈).

Precauciones: (Lea por favor las precauciones cuidadosamente antes de usar el equipo)

- La plantilla recomienda el usar de muestras frescas o el ARN preservó bajo -80 ° C (el ARN debe evitar hielo-deshielo repetida, asegurando integridad del ARN, ninguna degradación).

- Para evitar la contaminación de la ARNASA, la operación experimental se realiza en espacio ARNasa-libre; la cabeza del arma y la centrifugadora de la polimerización en cadena se deben garantizar para ser ARNasa-libres; y lleve los guantes disponibles y las máscaras.

- Antes de usar, la MEZCLA de la mezcla de GDNase de 5 × y 5 del × L-RT HEROTM se pone en el hielo para hacerlo derretida totalmente, y se mezcla la bala ligera; el sistema se formula, actúa por favor en un baño de hielo para mejorar el funcionamiento del equipo, mejora el funcionamiento de la especificidad de la amplificación de la polimerización en cadena del equipo.

- 5 la MEZCLA del × L-RT HEROTM ha añadido una cartilla reversa optimizada de la transcripción del ratio sin el adición de ningunas cartillas a las cartillas adicionales adicionales.

- Para la plantilla compleja del ARN de la estructura secundaria, la temperatura de la reacción se puede aumentar 50 al ° C

Flujo de trabajo:

Almacenamiento y vida útil:

Los equipos estupendos de la polimerización en cadena de la mezcla preparada de antemano se deben almacenar en -20°C. almacenan el producto en un refrigerador de la temperatura constante en -20°C inmediatamente después del recibo. Si las condiciones de almacenamiento son apropiadas, el producto no degradará ningún funcionamiento durante el período de un año de la validez.

Guía del análisis de problema

Lo que sigue es un análisis de los problemas que se pueden encontrar en el uso de los equipos de la serie del Lnc-RT HeroTM I (con gDNase), esperando ser útil a sus experimentos. Además, hemos dedicado el soporte técnico para ayudarle con otros problemas experimentales o técnicos más allá de las instrucciones de funcionamiento y de las preguntas. Si usted tiene cualesquiera necesidades, éntrenos en contacto con por favor: 028-83361257 o email: Tech@foregene.com.

Amplificación no específica

1. Diseño irrazonable de la cartilla

Recomendación: Cartillas del diseño según principios de diseño de la cartilla.

2. Residuos del genoma.

Sugerencia: Asegúrese de que el primer paso de la temperatura de la reacción del retiro del gDNA sea 42°C, y el tiempo de reacción puede también ser extendido a 5min.

Ninguna señal de la amplificación por el RT-qPCR

1. Se degrada el ARN.

Recomendación: El material para la extracción del ARN debe estar tan fresco como sea posible, y el ARN de alta calidad y de gran pureza debe ser utilizado.

2. El ARN contiene los inhibidores.

Recomendación: Los inhibidores reversos de la transcripción incluyen generalmente el SDS, las sales de la guanidina, el EDTA, el etc. Se recomienda para lavar el precipitado del ARN con etanol del 70% para quitar los inhibidores.

3. Problemas de diseño de la cartilla.

Recomendación: Según el principio de diseño de la cartilla, reajuste las cartillas para la inspección.

La banda de la blanco aparece en el control en blanco

1. Contaminación de herramientas o de reactivo de funcionamiento.

Recomendación: Todos los reactivo o equipo para el experimento deben ser esterilizados. Sea cuidadoso y apacible al dirigir para evitar que las muestras de la DNA sean chupadas en la pipeta o se derramó fuera del tubo de centrífuga.

2. La contaminación ocurrió durante la preparación del sistema de reacción de la polimerización en cadena.

Recomendación: Tome las precauciones necesarias al dirigir, por ejemplo: guantes del látex que llevan, usando extremidades de filtro. Utilice la mezcla en tiempo real de la polimerización en cadena en un sistema de la contaminación-prueba.

3. Se degradan las cartillas.

Sugerencia: Utilice la electroforesis de SDS-PAGE para detectar si las cartillas están degradadas, y substitúyala por las nuevas cartillas para los experimentos de la detección de la fluorescencia.