RT-QPCR EasyTM (un paso) - Taqman Cat.No.RT - 02131/02132 mezcla principal en tiempo real de un solo paso de RT-PCR

Cat.No.RT - 02131/02132

Mezcla principal en tiempo real de un solo paso de RT-PCR

RT-PCR EasyTM I (un paso)

Cat.No.RT - 02011/02012

Mezcla principal de un solo paso de RT-PCR

Para el uso de la investigación solamente

Tienda en -20℃

Introducción de productos

Los productos de un solo paso de la serie de Foregene RT-PCR EasyTM realizan que la reacción integrada del ARN a la DNA doble-trenzada, es decir, invierte la transcripción y amplificación de la polimerización en cadena está terminada en el mismo tubo de centrífuga de la reacción y el mismo sistema de reacción, que simplifica los pasos experimentales, optimiza el programa experimental, y mejora la eficacia del experimento.

RT-qPCR EasyTM (un paso) - Taqman usando la polimerasa de DNA de Foregene HotStar Taq, el sistema optimizado del qPCR de Taqman puede realizar rápidamente y específicamente la detección cuantitativa en tiempo real RT-qPCR de plantillas del ARN del rastro.

Características

- El equipo de un solo paso permite la transcripción reversa y la polimerización en cadena que se realizará en el mismo tubo, necesita solamente añadir el ARN de la plantilla, las cartillas específicas de la polimerización en cadena y ddH2O ARNasa-libre.

- El análisis cuantitativo en tiempo real del ARN viral o del ARN del rastro se puede realizar rápidamente y exactamente.

- El equipo utiliza una polimerasa única el reactivo de la transcripción del revés de Foregene y de DNA de Foregene HotStar Taq combinada con un sistema de reacción único para mejorar con eficacia la eficacia de la amplificación y la especificidad de la reacción.

- El sistema de reacción optimizado hace la reacción tiene una sensibilidad más alta de la detección, una estabilidad termal más fuerte, y mejor tolerancia.

- El RT-qPCR EasyTM (un paso) - equipo de Taqman viene con el tinte interno de la referencia de ROX, que se puede utilizar para eliminar el fondo de la señal y errores de la señal entre los pozos, que es conveniente para que los usuarios finales utilicen en diversos modelos de los instrumentos cuantitativos de la polimerización en cadena

El control de la calidad del producto

Según el sistema de gestión total de la calidad de FOREGEN (sistema de gestión total de la calidad de FOREGENE), cada lote de equipos de RT-PCR EasyTM I (un paso) se prueba estrictamente las épocas múltiples de asegurar la calidad, la confiabilidad y la estabilidad de cada lote de los equipos.

Kit Contents

Condiciones del transporte y de almacenamiento

condiciones 1.Transportation

El proceso entero del transporte a baja temperatura de la caja de hielo, asegurarse de que el equipo esté en un estado de <4>

2. Condiciones de almacenamiento

RT EasyTM me almacenan en -20°C. almaceno el producto en un refrigerador de la temperatura constante en -20°C inmediatamente después del recibo. Si las condiciones de almacenamiento son apropiadas, el producto no degradará ningún funcionamiento durante el período de un año de la validez.

Información componente del equipo

Mezcla de 2× RT-PCR EasyTM: Revés Transcriptase de Foregene, polimerasa de DNA del inhibidor de la ARNasa, de Foregene HotStar Taq, dNTPs, Mg2+, almacenador intermediario de la reacción, optimizador y estabilizador, etc.

Precauciones: (Lea por favor las precauciones cuidadosamente antes de usar el equipo)

Para las plantillas, se recomienda para utilizar el ARN extraído de muestras frescas o almacenado en -80℃ (el ARN debe evitar la congelación repetida y el deshielo).

Para evitar la contaminación de la ARNasa, la operación del experimento se debe realizar en el espacio ARNasa-libre; las extremidades de la pipeta y los tubos de centrífuga de la polimerización en cadena usados deben ser ARNasa-libres; y los guantes disponibles y las máscaras deben ser llevados. Antes de usar, ponga la mezcla de 2×RT-PCR EasyTM en el hielo totalmente al derretimiento, a la película y a la mezcla mucho antes uso; la preparación del sistema se debe actuar en un baño de hielo para mejorar el funcionamiento del equipo y la especificidad de la amplificación de la polimerización en cadena.

Concentración del ARN de la plantilla

RT-PCR EasyTM I (un paso): (sistema)/20μl del ARN del total 0.1pg-1μg

Kit Application

- Este equipo se utiliza para la detección rápida de alto-copia y de genes de la bajo-copia.

- Es especialmente conveniente para la detección rápida de plantillas del ARN con la alta estructura secundaria contenta o compleja de la CROMATOGRAFÍA GASEOSA.

El control de la calidad del producto

Según el sistema de gestión total de la calidad de FOREGEN (sistema de gestión total de la calidad de FOREGENE), cada lote de equipos de RT-PCR EasyTM I (un paso) se prueba estrictamente las épocas múltiples de asegurar la calidad, la confiabilidad y la estabilidad de cada lote de los equipos.

Guía de la operación

: Preparación de materiales y de reactivo

1. Prepare la plantilla preparada del ARN (se recomienda para utilizar equipos de la serie del equipo del aislamiento del ARN del total de Foregene para extraer y para purificar el ARN), las cartillas específicas (el 10μM) y los materiales consumibles y los instrumentos relacionados.

Nota: Asegure por favor la integridad del ARN e intente utilizar el ARN extraído de muestras frescas.

2. La mezcla del lugar 2× RT-PCR EasyTM y ddH2O ARNasa-libres en un baño de hielo para dejarlo derretir naturalmente, y chasquean la pared del tubo para mezclarse bien para su uso posterior.

B: Preparación del sistema de RT-PCR

La mezcla de 2×RT-PCR EasyTM es conveniente y rápida de utilizar, evitando la contaminación durante la operación y los errores experimentales causados por las preparaciones múltiples del sistema de reacción en la mayor medida posible. Al usar, solamente la mitad del volumen del sistema de reacción (por ejemplo, si el sistema de reacción es 20μl, solución de la mezcla de la toma 10μl 2×RT-PCR EasyTM), añade la cantidad apropiada de plantilla del ARN y de cartillas específicas, y añade ddH2O ARNasa-libre para componer el volumen. Refiera al cuadro 1 abajo para la preparación específica del sistema de reacción de RT-PCR.

Forma 1: Preparación del sistema de RT-PCR

1*: La concentración final de cartilla es generalmente los 0.2-0.25μM para conseguir mejores resultados. Cuando el funcionamiento de la reacción es pobre, la concentración de la cartilla se puede ajustar dentro de la gama de los 0.1-0.5μM.

Nota: La cartilla delantera y la cartilla reversa son las cartillas específicas para el gen de la blanco; el sistema 50μl, refiere por favor al sistema 20μl para ajustar la dosificación el reactivo proporcional.

C: Determinación del programa de la reacción de RT-PCR

• Después de preparar el sistema de RT-PCR referente a la tabla antedicha, mezcla suavemente (usted puede utilizar extremidad de la pipeta para soplar suavemente; usted puede también mezclarse en un vortexer y una centrifugadora brevemente para recoger el líquido dispersado en la pared del tubo o el casquillo del tubo, y un lugar en la caja de hielo para su uso posterior).

2. Refiera a los ajustes del programa de la reacción de RT-PCR (cuadro 2) para fijar la temperatura y el tiempo de la reacción.

Nota: Para asegurar la actividad de la mezcla de 2×RT-PCR EasyTM y mejorar su eficacia de la amplificación, es el mejor preparar el sistema de reacción de RT-PCR después de fijar el programa del instrumento de la polimerización en cadena, para poder incorporar el programa de la reacción inmediatamente después que se prepara el sistema.

Forma 2: Ajuste del sistema de reacción de RT-PCR

Nota: El procedimiento antedicho está para la referencia solamente. Las condiciones reales de la reacción varían dependiendo de las condiciones estructurales de la plantilla, de las cartillas, del etc. Para las plantillas del ARN con las estructuras secundarias complejas, la temperatura de la reacción para el primer paso de la transcripción reversa se recomienda para ser 50°C. En la operación específica, es necesario diseñar las condiciones óptimas de la reacción, incluyendo temperatura de recocido, tiempo de la extensión, etc. según las condiciones específicas del tamaño del fragmento de la blanco, la secuencia baja del fragmento amplificado, y el contenido de la CROMATOGRAFÍA GASEOSA y la longitud de la cartilla.
Diagrama de la operación de RT-PCR

Revés Transcriptase de Foregene

El transcriptase del revés de Foregene puede proporcionar la reacción reversa muy eficiente y específica de la transcripción. El transcriptase reverso exhibe alta afinidad y todavía mantiene buena actividad reversa de la transcripción en una temperatura de la reacción de 50°C. Puede invertir bien transcribe el ARN con la estructura secundaria compleja que otros transcriptases reversos no pueden manejar. El revés Transcriptase de Foregene tiene alta sensibilidad y es aplicable en una amplia gama de cantidades del ARN (0.1pg≤RNA≤1μg).

Polimerasa de DNA de Foregene HotStar Taq

Proporciona una amplificación altamente específica de la polimerización en cadena. Cuando la transcripción reversa está en curso, la polimerasa de DNA es totalmente ineficaz y no obstaculiza la reacción reversa de la transcripción. Después del programa de la reacción de la polimerización en cadena, calentado a 94°C, se activa la polimerasa de DNA y se desactiva el transcriptase reverso. El proceso del caliente-principio elimina la formación de cartillas y de dimeros de recocido no específicos de la cartilla en el primer ciclo, asegurando altas especificidad y confiabilidad de la amplificación de la polimerización en cadena.

Precaución: (Lea por favor las precauciones cuidadosamente antes de usar el equipo)

- Los reactivo deben evitar la congelación repetida y el deshielo, si no el funcionamiento de los reactivo disminuirá o llegará a ser inválido.

- Se recomienda para utilizar la extracción de la muestra o el ARN fresca de la plantilla almacenado en -80℃ (el ARN debe evitar la congelación repetida y el deshielo).

- Para evitar la contaminación de la ARNasa, la operación del experimento se debe realizar en el espacio ARNasa-libre; las extremidades de la pipeta y los tubos de la polimerización en cadena usados deben ser ARNasa-libres; y los guantes disponibles y las máscaras deben ser llevados.

- Este equipo se debe utilizar con las cartillas específicas para los experimentos. Seleccione por favor las cartillas específicas para que el gen sea amplificado según las necesidades del experimento.

- Antes de usar, ponga la mezcla de 2× RT-PCR EasyTM en el hielo totalmente al derretimiento, a la película y a la mezcla mucho antes uso; la preparación del sistema se debe actuar en un baño de hielo para mejorar el funcionamiento del equipo y la especificidad de la amplificación de la polimerización en cadena.

- Baño de hielo

reactivo Uno mismo-preparados

- Plantilla del ARN

- Cartillas específicas de la polimerización en cadena del gen

Seguridad

       - Este producto está para el uso de la investigación científica solamente, no lo utiliza por favor en medicina, medicina clínica, comida y cosméticos.

       - Ropa conveniente del laboratorio del desgaste, guantes, vidrios protectores, etc. al usar las sustancias químicas.

El control negativo tiene valor demasiado alto de la fluorescencia

1. Contaminación el reactivo causada durante la operación.

Recomendación: Substituya por los nuevos reactivo para los experimentos de RT-PCR.

2. La contaminación ocurrió durante la preparación del sistema de reacción de la polimerización en cadena. Recomendación: Tome las medidas protectoras necesarias durante la operación, por ejemplo: guantes del látex que llevan, usando una extremidad de la pipeta con un filtro, un etc.

3. Se degradan las cartillas, y la degradación de las cartillas llevará a la amplificación no específica.

Sugerencia: Utilice la electroforesis de SDS-PAGE para detectar si las cartillas están degradadas, y substitúyalos por las nuevas cartillas para los experimentos de RT-PCR.

Repetibilidad pobre de valores cuantitativos

1. El instrumento está funcionando incorrectamente.

Sugerencia: Puede haber errores entre cada agujero de la polimerización en cadena de la máquina de la polimerización en cadena, dando por resultado reproductibilidad pobre durante la gestión o la detección de la temperatura.

Realice por favor la prueba según las instrucciones del instrumento correspondiente.

2. La pureza de la muestra no es buena.

Recomendación: Las muestras impuras llevarán a la reproductibilidad pobre del experimento, que incluye la pureza de la plantilla y de las cartillas. Es el mejor repurify la plantilla, y las cartillas son purificadas mejor por SDS-PAGE.

3. El tiempo de la preparación y de almacenamiento del sistema de la polimerización en cadena es demasiado largo.

Sugerencia: Utilice el sistema de RT-PCR para los experimentos de la polimerización en cadena inmediatamente después de la preparación, y no lo deje durante demasiado tiempo; se recomienda para poner el programa de la polimerización en cadena antes del procedimiento con la preparación del sistema de RT-PCR.

4. Las condiciones de la amplificación de la polimerización en cadena no son convenientes, y la secuencia o la concentración de la cartilla es incorrecta.

Sugerencia: confirme la corrección de la secuencia de la cartilla y la cartilla no se ha degradado; cuando la señal de la amplificación no es buena, intente ajustar la temperatura de recocido y ajustar la concentración de la cartilla apropiadamente.