RT-PCR EasyTM II Cat.No.RT de dos etapas - equipos principales de dos etapas de 02021/02022 del RT de la polimerización en cadena polimerización en cadena de la mezcla

RT-PCR EasyTM II Cat.No.RT (de dos etapas) - equipos principales de dos etapas de 02021/02022 de RT-PCR polimerización en cadena de la mezcla

RT-PCR EasyTM II (de dos etapas)

Cat.No.RT - 02021/02022

Mezcla principal de dos etapas de RT-PCR

RT-PCR EasyTM II (de dos etapas)

Cat.No.RT - 02021/02022

Mezcla principal de dos etapas de RT-PCR

Para el uso de la investigación solamente

Tienda en -20℃

Introducción de productos

RT-PCR EasyTM II (de dos etapas) contiene todos los reactivo para RT-PCR de dos etapas, combinando la reacción del RT y la reacción de la polimerización en cadena en el mismo equipo, proporcionando la mezcla optimizada del RT y la mezcla de la polimerización en cadena. La mezcla única del RT puede sintetizar el cDNA de alta calidad del primero-filamento fácilmente y eficientemente. 2× el más de la mezcla de la polimerización en cadena EasyTM tiene amplificación de gran eficacia y específica. La combinación orgánica de los dos hace la detección del gen de la blanco más sensible.

Características

El análisis cuantitativo en tiempo real del ARN se puede realizar rápidamente y exactamente.

El equipo utiliza una polimerasa única el reactivo de la transcripción del revés de Foregene y de DNA de Foregene HotStar Taq combinada con un sistema de reacción único para mejorar con eficacia la eficacia de la amplificación y la especificidad de la reacción.

El sistema de reacción optimizado hace la reacción tiene una sensibilidad más alta de la detección, una estabilidad termal más fuerte, y mejor tolerancia.

Kit Contents

Condiciones del transporte y de almacenamiento

1. Condiciones del transporte

El proceso entero del transporte a baja temperatura de la caja de hielo, asegurarse de que el equipo esté en un estado de <4>

2. Condiciones de almacenamiento

Almacenado en -20°C. almacene el producto en un refrigerador de la temperatura constante en -20°C inmediatamente después del recibo. Si las condiciones de almacenamiento son apropiadas, el producto no degradará ningún funcionamiento durante el período de un año de la validez.

Información componente del equipo

Mezcla de 2× RT EasyTM: Revés Transcriptase de Foregene, inhibidor de la ARNasa, dNTPs, almacenador intermediario de la reacción, optimizador y estabilizador, etc.

2× más de la mezcla de la polimerización en cadena EasyTM: Polimerasa de DNA de Foregene Taq, dNTPs, Mg2+, almacenador intermediario de la reacción, optimizador y estabilizador.

Precauciones: (Lea por favor las precauciones cuidadosamente antes de usar el equipo)

Los reactivo deben evitar la congelación repetida y el deshielo, si no el funcionamiento de los reactivo disminuirá o llegará a ser inválido.

Para las plantillas, se recomienda para utilizar el ARN extraído de muestras frescas o almacenado en -80℃ (el ARN debe evitar la congelación repetida y el deshielo).

Para evitar la contaminación de la ARNasa, la operación del experimento se debe realizar en el espacio ARNasa-libre; las extremidades de la pipeta y los tubos de centrífuga de la polimerización en cadena usados deben ser ARNasa-libres; y los guantes disponibles y las máscaras deben ser llevados.

Este equipo se debe utilizar con las cartillas específicas para los experimentos. Seleccione por favor las cartillas específicas para que el gen sea amplificado según las necesidades del experimento.

Antes de usar, mezcla puesta de 2×RT EasyTM y más de la mezcla de 2×PCR EasyTM en el hielo totalmente al derretimiento, a la película y a la mezcla mucho antes uso; la preparación del sistema se debe actuar en un baño de hielo para mejorar el funcionamiento del equipo y para mejorar la especificidad de la amplificación de la polimerización en cadena.

Precauciones: (Lea por favor las precauciones cuidadosamente antes de usar el equipo)

- Los reactivo deben evitar la congelación repetida y el deshielo, si no el funcionamiento de los reactivo disminuirá o llegará a ser inválido.

- Para las plantillas, se recomienda para utilizar el ARN extraído de muestras frescas o almacenado en -80℃ (el ARN debe evitar la congelación repetida y el deshielo).

- Para evitar la contaminación de la ARNasa, la operación del experimento se debe realizar en el espacio ARNasa-libre; las extremidades de la pipeta y los tubos de centrífuga de la polimerización en cadena usados deben ser ARNasa-libres; y los guantes disponibles y las máscaras deben ser llevados.

- Este equipo se debe utilizar con las cartillas específicas para los experimentos. Seleccione por favor las cartillas específicas para que el gen sea amplificado según las necesidades del experimento.

- Antes de usar, mezcla puesta de 2×RT EasyTM y más de la mezcla de 2×PCR EasyTM en el hielo totalmente al derretimiento, a la película y a la mezcla mucho antes uso; la preparación del sistema se debe actuar en un baño de hielo para mejorar el funcionamiento del equipo y para mejorar la especificidad de la amplificación de la polimerización en cadena.

Concentración del ARN de la plantilla

RT-PCR EasyTM II (de dos etapas): (sistema)/20μl del ARN del total 0.1pg-5μg

Guía de la operación

A-1: Preparación de materiales y de reactivo

1. Prepare la plantilla preparada del ARN (se recomienda para utilizar equipos de la serie del equipo del aislamiento del ARN del total de Foregene para extraer y para purificar el ARN), las cartillas específicas (el 10μM) y los materiales consumibles y los instrumentos relacionados.

Nota: Asegure por favor la integridad del ARN e intente utilizar el ARN extraído de muestras frescas.

2. La mezcla puesta de 2×RT EasyTM y ddH2O ARNasa-libres en un baño de hielo para dejarlo derretir naturalmente, y chasquean la pared del tubo para mezclarse bien para su uso posterior.

A-2: Preparación del sistema del RT

La mezcla de 2× RT EasyTM es conveniente y rápida de utilizar, evitando la contaminación durante la operación y los errores experimentales causados por las preparaciones múltiples del sistema de reacción en la mayor medida posible. Al usar, apenas tome la mitad del volumen del sistema de reacción (por ejemplo, si el sistema de reacción es 20μl, solución de la mezcla de la toma 10μl 2×RT EasyTM), añada la plantilla del ARN y las cartillas reversas de la transcripción, y añada ddH2O ARNasa-libre para componer el volumen a 20μl. La preparación específica del sistema de reacción del RT puede referirse para presentar 1 abajo.

Forma 1: Preparación del sistema del RT

A-3: Determinación del programa de la reacción del RT

1. Después de preparar el sistema del RT referente a la tabla antedicha, mezcla suavemente (usted puede utilizar una extremidad de la pipeta para soplar suavemente; usted puede también mezclarla en el vortexer y centrifugarla para recoger el líquido dispersado en la pared del tubo o el casquillo del tubo, y lo coloca en listo para utilizar en la caja de hielo).

2. Refiera a los ajustes del programa de la reacción del RT (cuadro 2) para fijar la temperatura de la reacción, la hora, el etc.

Nota: Para asegurar la actividad de la mezcla y mejorar su eficacia de la amplificación, es el mejor preparar el sistema de reacción del RT después del baño del metal alcanza la temperatura determinada de la reacción (temperatura reversa 42℃ o 50℃ de la transcripción), para poder prepararse el sistema inmediatamente después de la realización de la preparación del sistema. Incorpore el programa de la reacción. La reacción del RT se puede también realizar en una máquina de la polimerización en cadena.

Forma 2: Determinación del programa de la reacción del RT

Nota: Al usar la cartilla al azar, la reacción se debe precalentar en 25℃ para 10min antes del primer paso de la reacción. El procedimiento antedicho está para la referencia solamente. Las condiciones reales de la reacción varían dependiendo de las condiciones estructurales de la plantilla, de las cartillas, del etc. Para las plantillas del ARN con resultados secundarios complejos, la primera temperatura de la reacción se recomienda para ser 50℃.

1. El producto de la reacción se puede utilizar directamente en pruebas subsiguientes, o almacenar en -20°C por hasta una semana. Para el almacenamiento de larga duración, se recomienda para evitar la congelación repetida y el deshielo en -80°C.

B: Reacción de la identificación de la polimerización en cadena

B-1: Preparación del sistema de reacción de la polimerización en cadena

Utilice el cDNA sintetizó en el paso A como plantilla, y realizan la reacción de la polimerización en cadena con el más de la mezcla de 2×PCR EasyTM proporcionado en el equipo. Más de la mezcla del lugar 2×PCR EasyTM, cDNA, y ddH2O ARNasa-libre en un baño de hielo para dejarlo derretir naturalmente, y chasquear la pared del tubo para mezclarse hasta uso. Para la preparación específica del sistema de la polimerización en cadena, refiera al cuadro 3 abajo.

Forma 3: 反应体系配制 de la preparación del sistema de reacción de la polimerización en cadena

1*: La concentración final de cartilla es generalmente los 0.2-0.25μM para conseguir mejores resultados. Cuando el funcionamiento de la reacción es pobre, la concentración de la cartilla se puede ajustar dentro de la gama de los 0.1-0.5μM.

B-2: Ajuste de la condición de la reacción de la polimerización en cadena

1. Después de preparar el sistema de la polimerización en cadena referente a la tabla antedicha, mezcla suavemente (usted puede utilizar una extremidad de la pipeta para soplar suavemente; usted puede también mezclarla en el vortexer y centrifugarla para recoger el líquido dispersado en la pared del tubo o el casquillo del tubo, y lo coloca en listo para utilizar en la caja de hielo).

2. Refiera a los ajustes del programa de la reacción de la polimerización en cadena (cuadro 4) para fijar la temperatura y el tiempo de la reacción.

Nota: Para asegurar la actividad de la mezcla de la polimerización en cadena y mejorar su eficacia de la amplificación, es el mejor fijar las condiciones de la polimerización en cadena en la máquina de la polimerización en cadena antes de preparar el sistema de la polimerización en cadena.

Forma 4: Ajuste de la condición de la reacción de la polimerización en cadena

1*: Fije un momento específico según la longitud del fragmento amplificado de la blanco. La velocidad de la amplificación de la polimerasa de DNA de Foregene Taq es 2kb/min.

Nota: Las condiciones de la reacción de la polimerización en cadena varían dependiendo de las condiciones estructurales de la plantilla, de las cartillas, del etc. Para las plantillas del ARN con las estructuras secundarias complejas, se recomienda que la temperatura de la reacción para el primer paso de la transcripción reversa es 50°C. En operaciones específicas, es necesario diseñar las condiciones óptimas de la reacción, incluyendo temperatura, tiempo de la extensión, etc. de recocido, según condiciones específicas tales como el tamaño del fragmento de la blanco, la secuencia baja del fragmento amplificado, y el contenido de la CROMATOGRAFÍA GASEOSA y la longitud de la cartilla.

Diagrama de la operación de RT-PCR