El paso SYBR de RT-QPCR EasyTM I uno me pone verde termina la detección cuantitativa de genes para el RT y la polimerización en cadena en tiempo real

RT-QPCR EasyTM I (un paso) - verde de SYBR termino rápidamente la detección cuantitativa de genes para el RT y la polimerización en cadena en tiempo real

RT-qPCR EasyTM (un paso) - verde I de SYBR

Cat.No.RT - 02111/02112

Mezcla principal en tiempo real de un solo paso de RT-PCR

Para el uso de la investigación solamente

Tienda en -20℃

Introducción de productos

RT-qPCR EasyTM (un paso) - verde Iuses de SYBR un sistema único para combinar con eficacia el RT y las reacciones en tiempo real de la polimerización en cadena, que pueden terminar rápidamente la detección cuantitativa de genes. El producto tiene tolerancia fuerte, alta especificidad y estabilidad. El producto contiene la polimerasa de DNA única de Foregene HotStar Taq de la compañía, que tiene las ventajas de una amplificación más rápida (2Kb/min), de la alta eficacia de la amplificación, de la capacidad específica fuerte de la amplificación, y de la tarifa baja de la unión mal hecha comparada con las enzimas ordinarias de Taq. Se utiliza aquí para que RT-PCR en tiempo real reduzca la amplificación no específica y mejore la exactitud de la polimerización en cadena.

Características

El equipo de un solo paso hace la transcripción reversa y las reacciones del qPCR dos en el mismo tubo, necesitan solamente añadir el ARN de la plantilla, las cartillas específicas de la polimerización en cadena y ddH2O ARNasa-libre.

El equipo puede de manera rápida y eficiente analizar cuantitativo el ARN viral o el ARN del rastro.

El equipo utiliza una polimerasa única el reactivo de la transcripción del revés de Foregene y de DNA de Foregene HotStar Taq combinada con un sistema de reacción único para mejorar con eficacia la eficacia de la amplificación y la especificidad de la reacción.

El sistema de reacción optimizado hace la reacción tiene una sensibilidad más alta de la detección, una estabilidad termal más fuerte, y mejor tolerancia.

El RT-qPCR EasyTM (un paso) - equipo del verde I de SYBR viene con el tinte interno de la referencia de ROX, que se puede utilizar para eliminar el fondo de la señal y errores de la señal entre los pozos, que es conveniente para que los clientes utilicen en diversos modelos de los instrumentos cuantitativos de la polimerización en cadena.

Kit Contents

Condiciones del transporte y de almacenamiento

condiciones 1.Transportation

El proceso entero del transporte a baja temperatura de la caja de hielo, asegurarse de que el equipo esté en un estado de <4>

2. Condiciones de almacenamiento

• El equipo se almacena en -20℃. Almacene el producto en un refrigerador de la temperatura constante en -20℃ inmediatamente después del recibo. Si las condiciones de almacenamiento son apropiadas, el producto no degradará ningún funcionamiento durante el período de un año de la validez.
• el componente de la mezcla-SYBR de 2×RT-qPCR EasyTM contiene el verde I de SYBR, lo guarda por favor lejos de luz.

Información componente del equipo

Mezcla-SYBR de 2× RT-qPCR EasyTM: Revés Transcriptase, inhibidor de la ARNasa, polimerasa de DNA de Foregene HotStar Taq, ratio optimizado de Foregene de los dNTPs, SYBR GreenI, Mg2+, estabilizadores, reforzadores, y optimizadores.

Tinte de la referencia de ROX: se utiliza generalmente en los amplificadores en tiempo real de la polimerización en cadena de compañías tales como ABI y Stratagene para ajustar la diferencia entre los tubos de la polimerización en cadena y los tubos causados por errores de cargamento de la muestra de la polimerización en cadena. La concentración de tinte de la referencia de ROX requerido por diversos instrumentos es diferente, y el usuario puede añadirla según la concentración recomendada del instrumento.

Precauciones: (Lea por favor las precauciones cuidadosamente antes de usar el equipo)

Los reactivo deben evitar la congelación repetida y el deshielo, si no el funcionamiento de los reactivo disminuirá o llegará a ser inválido.

Los reactivo en el equipo se deben proteger contra luz y almacenar en -20°C.

Se recomienda para utilizar la extracción de la muestra o el ARN fresca de la plantilla almacenado en -80°C (el ARN debe evitar la congelación repetida y el deshielo).

Para evitar la contaminación de la ARNasa, realice por favor el experimento en el espacio ARNasa-libre; las extremidades de la pipeta y los tubos de la polimerización en cadena usados deben ser ARNasa-libres; y lleve los guantes disponibles y las máscaras.

Este equipo se debe utilizar con las cartillas específicas para los experimentos. Seleccione por favor las cartillas específicas para que el gen sea amplificado según las necesidades del experimento.

Antes de usar, mezcla-SYBR puesta I de 2×RT-qPCR EasyTM en el hielo totalmente al derretimiento, película y mezcla mucho antes uso; la preparación del sistema se debe actuar en un baño de hielo para mejorar el funcionamiento del equipo y para aumentar la amplificación de la polimerización en cadena la especificidad.

la mezcla-SYBR de 2×RT-qPCR EasyTM contiene el verde I de SYBR, evita por favor la luz fuerte.

Concentración del ARN de la plantilla

RT-qPCR EasyTM (un paso) - verde I de SYBR: (sistema)/20μl del ARN del total 0.1pg-100ng.

Guía de la operación

: Preparación de materiales y de reactivo

1. Prepare la plantilla preparada del ARN (se recomienda para utilizar equipos de la serie del equipo del aislamiento del ARN del total de Foregene para extraer y para purificar el ARN), las cartillas específicas (el 10μM) y los materiales consumibles y los instrumentos relacionados.

Nota: Asegure por favor la integridad del ARN e intente utilizar el ARN extraído de muestras frescas.

2. Mezcla-SYBR puesta de 2×RT-qPCR EasyTM, tinte ARNasa-libre de la referencia ddH2O, y 50×ROX (en caso de necesidad) en el hielo para dejarlo derretir naturalmente, y chasquear la pared del tubo para mezclarse hasta uso.

B: Preparación del sistema RT-qPCR

La mezcla-SYBR de 2× RT-qPCR EasyTM es conveniente y rápida de utilizar, y evita la contaminación durante la operación y los errores experimentales causados por las preparaciones múltiples del sistema de reacción en la mayor medida posible. Al usar, solamente la mitad del volumen del sistema de reacción (por ejemplo, si el sistema de reacción es 20μl, solución de la mezcla-SYBR de la toma 10μl 2×RT-qPCR EasyTM), añade la plantilla del ARN y las cartillas específicas, y añade ddH2O ARNasa-libre para componer el volumen. Refiera al cuadro 1 abajo para la preparación específica del sistema de reacción RT-qPCR

Forma 1: Preparación del sistema RT-qPCR

1*: La concentración final de cartilla es generalmente los 0.2-0.25μM para conseguir mejores resultados. Cuando el funcionamiento de la reacción es pobre, la concentración de la cartilla se puede ajustar dentro de la gama de los 0.1-0.5μM.

Nota: La cartilla delantera y la cartilla reversa son cartillas específicas para el gen de la blanco.

2*: Elija la concentración final apropiada de tinte de la referencia de ROX según diversos instrumentos cuantitativos de la polimerización en cadena. La concentración óptima de tinte de la referencia de ROX para las máquinas cuantitativas comunes de la polimerización en cadena se muestra en la tabla siguiente:

C: Ajuste del sistema de reacción RT-qPCR

• Después de preparar el sistema RT-qPCR referente a la tabla antedicha, mezcla suavemente (usted puede utilizar una extremidad de la pipeta suavemente a la pipeta; usted puede también mezclarse en un vortexer y una centrifugadora brevemente para recoger el líquido dispersado en la pared del tubo o el casquillo del tubo, y un lugar en la caja de hielo para su uso posterior).

2. Refiera a los ajustes del programa de la reacción RT-qPCR (cuadro 2) para fijar la temperatura y el tiempo de la reacción.

Nota: Para asegurar la actividad de la mezcla-SYBR de 2×RT-qPCR EasyTM y mejorar su eficacia de la amplificación, es el mejor preparar el sistema de reacción RT-qPCR después de poner el programa del instrumento de la polimerización en cadena, para poder incorporar el programa de la reacción inmediatamente después que se termina la preparación del sistema.

3. Para conseguir el mejor efecto del qPCR, la polimerización en cadena de la pendiente se puede utilizar para optimizar las condiciones de la reacción para diversas plantillas y diversas cartillas.

Nota: La extensión que la gama de temperaturas de la polimerasa de DNA de Foregene Hotstar Taq proporcionó en este equipo es: 60-72℃, y la mejor temperatura de la extensión es 72℃.

Lo que sigue es un ejemplo de las condiciones de la reacción RT-qPCR. Se recomienda para utilizar un método de dos etapas para la reacción de la polimerización en cadena. Cuando la concentración de la plantilla es demasiado baja causar la amplificación no específica, el valor bajo de TM de la cartilla lleva a la eficacia baja de la amplificación o repetibilidad pobre de la curva de la amplificación, etc., se recomienda para intentar el método del tres-paso para la reacción de la polimerización en cadena. Refiera al cuadro 2-1 (método de dos etapas) y al cuadro 2-2 (método del tres-paso) para el ajuste de las condiciones de la reacción RT-qPCR.

Forma 2-1: Determinación del programa de la reacción RT-qPCR (de dos etapas)

Forma 2-2: Determinación del programa de la reacción RT-qPCR (paso tres)

1*: El tiempo reverso de la transcripción se puede ajustar según necesidades experimentales. Los genes endógenos generales tales como β-actinia necesitan solamente 10 minutos; para detectar genes expresados específicos, el tiempo reverso de la transcripción se puede prolongar apropiadamente según las necesidades.

2*: Fije un momento específico según la longitud del fragmento amplificado de la blanco. La velocidad de la amplificación de la polimerasa de DNA de Foregene HotStar Taq es 2kb/min.

Nota: Las condiciones de la reacción de la polimerización en cadena varían dependiendo de las condiciones estructurales de la plantilla, de las cartillas, del etc. Para las plantillas del ARN con las estructuras secundarias complejas, se recomienda para utilizar 42℃ para el primer paso de la transcripción reversa. En la operación específica, es necesario diseñar las condiciones óptimas de la reacción según las condiciones específicas tales como el tamaño del fragmento de la blanco, la secuencia baja del fragmento amplificado y el contenido de la CROMATOGRAFÍA GASEOSA y la longitud de la cartilla, incluyendo temperatura, tiempo de la extensión, el etc. de recocido.

Diagrama de la operación