El 12 de octubre de 2021, el equipo de Zhou Xi del instituto de Wuhan del laboratorio de la llave de la virología/del estado de la virología, la academia de ciencias china y Lulu Team del Ministerio de Educación de la virología molecular médica/del laboratorio dominante de la salud y de la Comisión de la salud de la universidad de Fudan publicada en común en revista de la “inmunidad” titularon el trabajo de investigación “inhibición del supresor viral de las proteínas de RNAi por los designerpeptides protege contra la infección enteroviral in vivo” revela por primera vez que el diseño racional de inhibidores del polipéptido a los supresores de RNAi del enterovirus de la blanco puede romper específicamente con eficacia el efecto de VSR del virus. La inhibición de RNAi lanza completamente la función inmune antivirus de RNAi, que es una prueba fuerte que el mecanismo inmune de RNAi todavía existe en mamíferos. Debido a la buena actividad antivirus y a la alta seguridad exhibidas por este mecanismo inmune en células y animales, su potencial para el desarrollo clínico es extremadamente alto.
Guerra inmune: ambos lados que participan en guerra en cualquier momento, un campo de batalla con medios frecuentes
Desde el principio de vida, es no la clase hola y yo, sino el campo de batalla cruel de su vida y muerte. Usted sale de mi césped o usted para permanecer y para ser una parte de mí.
De las espinas dorsales de la macroescala, cuernos, garras, y dientes, a la fagocitosis, a la disolución, y al envenenamiento en el nivel celular, al corte, a la interferencia, y a la degradación de estructuras moleculares; de in vitro a in vivo, de extracelular a intracelular: Recepción a la batalla de Difen A de la batalla de la vida y de la muerte-uno de la inmunidad que comienza en cualquier momento.
RNAi - un mecanismo inmune antivirus natural y eficiente
En esta guerra sin restricción, hay un mecanismo inmune (altamente conservado) natural (el negocio principal regula la expresión génica, y el negocio lateral está contra la invasión del virus), eficiente, estable y ubicuo - RNAi (interferencia del ARN), que se considera estar en el función antivirus más importante de hongos, de plantas y de invertebrados. En fin, el ARN doble-trenzado (dsRNA) producido por la réplica del virus es reconocido por la proteína de Dicer del camino de RNAi y hendido en el pequeño ARN de interferencia virus-derivado (siRNA, vsiRNA virales), y después montado en el complejo que silencia ARN-inducido (ARN-inducido silenciando el complejo). complejo, RISC), de tal modo apuntando la degradación del ARN viral. Correspondientemente, la mayoría de los virus también han desarrollado mecanismos antagónicos correspondientes, es decir, para escapar la inmunidad antivirus de RNAi por los supresores virales de codificación de RNAi (supresor viral de RNAi, VSR).
Descubrimiento de los mecanismos inmunes de RNAi en mamíferos
Sin embargo, puesto que el vsiRNA formado por la hendidura del ARN viral no se ha encontrado en células mamíferas, el mecanismo inmune de RNAi se considera ser una “reliquia evolutiva” que fue abandonada después de que los mamíferos desarrollaran otros mecanismos antivirus. Sin embargo, desde 2017, varios estudios relacionados han encontrado una variedad de VSRs derivado de los virus, confirmando que el mecanismo inmune de RNAi no desaparece en células mamíferas, pero son inhibidos por los virus. Al mismo tiempo, con el descubrimiento de las proteínas de VSR codificado por una variedad de virus humanos importantes, el mecanismo molecular de su antagonismo del camino de RNAi se ha revelado.
péptidos VSR-apuntados: una nueva dirección para el desarrollo de la droga
En este estudio, el equipo de investigación innovador diseñó dos péptidos de VSR-alcance (VSR-que apuntan los péptidos, VTP), P1 y P2, sobre la base de las secuencias helicoidales A1 y A2 de la proteína del enterovirus EV-A713A VSR. Detectando la acumulación del ARN EV-A71 en las variedades de células seleccionadas, fue mostrado que P1 y P2 inhibieron con eficacia la réplica del virus de una manera dosis-dependiente.
Entonces, según los resultados experimentales, una serie de péptidos fue sintetizada más a fondo referente a la secuencia P2 con un mejor efecto, y fue encontrado que el isoform modificado transcripción-transformación D-reversa (ER-DRI) del péptido ER tenía el mejor efecto inhibitorio sobre la réplica viral del ARN. Para confirmar que esta serie de blanco de VTPs y desactivar EV-A71 3AVSR y desbloquear la actividad antivirus de RNAi, ARN total de las células infectadas fue extraída y profundo-ordenada. Los resultados mostraron que los vsiRNAs detectados fueron derivados de hecho de EV-A71. Entre ellos, la purificación y la extracción del ARN del virus EV-A71 en células infectadas fueron realizadas usando equipo viral del aislamiento del ARN de Qiagen y de Foregene. (Este equipo utiliza la columna y la fórmula de la vuelta desarrolladas por Foregene, que puede extraer eficientemente el ARN viral de gran pureza y de alta calidad de muestras tales como plasma, suero, fluído corporal sin células, y cultivo celular
sobrenadante. El equipo añade específicamente la acrilamida linear, que puede capturar fácilmente pequeñas cantidades de ARN de las muestras. La columna del ARN-Solamente puede atar eficientemente el ARN. El equipo puede procesar un gran número de muestras al mismo tiempo.
El equipo entero no contiene la ARNasa, así que el ARN purificado no será degradado. El almacenador intermediario viRW1 y el almacenador intermediario viRW2 pueden asegurarse de que el sin ácido nucléico viral obtenida de la proteína, de la nucleasa o de otras impurezas, que se pueden utilizar directamente para los experimentos rio abajo de la biología molecular.)
Equipo del aislamiento del ARN de Vrial
Al mismo tiempo, VTP no podía ejercer efecto antivirus sobre el virus EV-A71 con la mutación y la eliminación de la función 3A-VSR, así como en células de Dicer1 o de AGO2-deficient infectado con el virus EV-A71. Se prueba que su mecanismo de la acción está apuntando 3A-VSR y depende de hecho del camino de RNAi.
Para investigar el potencial preclínico de ER-DRI, el equipo de investigación evaluó su efecto antivirus en EV-A71 virus-infectó ratones por la inyección intraperitoneal de péptidos fluorescente etiquetados. Los resultados mostraron que ER-DRI también estimuló la inmunorespuesta antivirus de RNAi en ratones, inhibió la réplica de EV-A71, mejoró los síntomas clínicos de ratones infectados, y redujo la muerte de los ratones causados por la infección. Al mismo tiempo, la prueba de toxicidad aguda mostró que ER-DRI no tenía ningún daño obvio a la salud de ratones.
El mecanismo inmune de RNAi desbloqueado por VTPs es bastante potente mediar actividad antivirus eficiente, claramente demostrando la importancia fisiológica y la viabilidad terapéutica de RNAi como inmunidad antivirus en mamíferos. Además, este estudio ha demostrado que VSRs es blancos druggable, proporcionando una estrategia nueva para apuntar VSRs para la terapia antivirus, y los péptidos como ER-DRI mantienen considerable promesa como primero-en-clase VTDs para las infecciones del enterovirus.
Vínculo del artículo: La inhibición del supresor viral de las proteínas de RNAi por los péptidos del diseñador protege contra la infección enteroviral in vivo - PubMed (nih.gov)
Vínculo del producto: Equipo viral del aislamiento del ARN
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