Ventaja
El ARN largo de la no-codificación, lncRNA es un ARN de la no-codificación con mayores de 200 nucleótidos de una longitud, generalmente entre NT 200-100000. el lncRNA regula la expresión génica en epigenético, transcripción y los niveles poste-transcriptivos, y participa en el cromosoma X que silencia, genoma que imprime y la modificación de la cromatina, la activación de la transcripción, interferencia de la transcripción, el transporte nuclear, la regulación del ciclo celular, la regulación de la diferenciación de célula, y los efectos de la remuneración de la dosis (efecto de la remuneración de la dosificación) y muchos otros procesos de regla importantes están estrechamente vinculados al acontecimiento, al desarrollo y a la prevención de enfermedades humanas, y son actualmente una de las zonas activas en el campo de la biomedecina.
01 tipos y características de LncRNA
el lncRNA se divide en muchos tipos según las diferentes fuentes de su formación, tal y como se muestra en de la figura arriba. Tiene las siguientes características:
1. los lncRNAs son generalmente más largos, con la expresión dinámica y diversos métodos que empalman durante la diferenciación
2. comparado con la codificación de genes, el lncRNA tiene generalmente un nivel más bajo de la expresión
3. La mayoría de los lncRNAs tienen especificidad temporal y espacial obvia de la expresión en curso de diferenciación y desarrollo del tejido
4. Hay expresiones características en tumores y otras enfermedades
5. Las ubicaciones subcelulares del lncRNA son diversas
6. La secuencia es baja en la protección, pero la función tiene cierto grado de protección, de etc.
02 preguntas con frecuencia hechas sobre la transcripción del revés de LncRNA
Debido al contenido bajo del lncRNA en las células, longitud larga y estructura de alto nivel, tal ARN tiene a menudo estructuras complejas tales como lazos u horquillas del tronco, y el RT-qPCR es problemas propensos de la transcripción reversa fracasada o del bajo rendimiento.
Solución de la transcripción del revés de 03 LncRNA
En la regla central, el proceso de los virus del ARN usando su propio transcriptase reverso para sintetizar la DNA usando el ARN como una plantilla se llama transcripción reversa. El proceso de usar transcriptase reverso del virus del ARN para sintetizar la plantilla del cDNA in vitro se llama transcripción reversa. Los elementos principales incluyeron en el sistema reverso de la transcripción: Plantilla del ARN, transcriptase reverso, cartillas y otros componentes.
Plantilla 1.RNA
La influencia de la plantilla del ARN en la transcripción reversa se refleja en su estructura, pureza y integridad. Cuanto más altas es la pureza y la integridad del ARN extraído, del más alta es la eficacia de la transcripción reversa y del más exacta los resultados cuantitativos subsiguientes. El ARN purificado por los reactivo de uso general de la extracción del ARN contiene a menudo residuos de sales del alcohol y de la guanidina, que tienen un efecto inhibitorio fuerte sobre la mayoría del transcriptase reverso.
transcriptase 2.Reverse
El transcriptase reverso tiene una influencia dominante en el sistema reverso entero de la transcripción. La temperatura conveniente para el transcriptase reverso usado en la mayoría de los laboratorios es generalmente 42°C. de hecho, la abertura de la estructura de alto nivel del ARN requiere una temperatura más alta, y los requisitos para el transcriptase reverso son más altos.
3.Primer
Las cartillas reversas de la transcripción incluyen las cartillas gen-específicas, las cartillas al azar y las cartillas oligas de despegue. La mayoría de los lncRNAs no contienen las colas de polyA, y es importante hacer juego correctamente las cartillas al azar con despegue oligo.
componentes 4.Other
Teniendo en cuenta que el ARN es particularmente fácil de degradar, la introducción de componentes en el sistema reverso de la transcripción puede ser minimizada, que puede prevenir con eficacia la entrada de la ARNasa y asegurar el progreso liso de la transcripción reversa.
Foregene obtiene de plantilla del ARN, transcripción reversa al qPCR escolta completo su detección del lncRNA
Equipo total animal del aislamiento del ARN (con la columna del retiro del gDNA)
Equipo total del aislamiento del ARN de la célula (con la columna del retiro del gDNA)
Lnc-RT HeroTM I (con el gDNase) (mezcla preparada de antemano estupenda para la síntesis del cDNA del primero-filamento del lncRNA)
Verde en tiempo real I de la polimerización en cadena EasyTM-SYBR
Ventajas de la extracción del ARN:
El equipo utiliza la tecnología de tercera generación de la extracción del ARN, ninguna necesidad de utilizar la ADNasa.
11 minutos a partir de la placa bien el 96, 24, 12, y 6 cultivaron las células, extracción de gran eficacia del ARN total gDNA-libre, de gran pureza, de alta calidad de la célula.
Ventajas de la transcripción reversa del lncRNA:
Un sistema reverso de la transcripción desarrollado especialmente para que LncRNA quite rápidamente la contaminación genomic de la DNA.
El sistema reverso de la transcripción tiene alta estabilidad termal y todavía tiene buen funcionamiento reverso de la transcripción en 50°C.
Las plantillas con el alto contenido de la CROMATOGRAFÍA GASEOSA y la estructura secundaria compleja se pueden invertir con eficacia alta.
Ventajas del qPCR:
La polimerasa de Foregene Taq del comienzo caliente tiene una eficacia más alta de la amplificación, una sensibilidad más alta de la amplificación, y especificidad más alta de la amplificación.
La mezcla fácil real optimizada de la polimerización en cadena hace verde de SYBR que tengo sensibilidad más alta de la detección, y su intensidad de la fluorescencia es 3-5 veces que de los productos similares, que pueden cubrir las necesidades de diversos tipos de experimentos cuantitativos de la fluorescencia.
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